De faktorer, der bestemmer DNA-synteseeffektiviteten

I den typiske DNA-, RNA- og ikke-naturlige nukleinsyresyntese spiller afbeskyttelses- og koblingstrinnet afgørende roller.

Afbeskyttelsestrinet er at fjerne DMT-gruppen på den faste bærer eller 5'-hydroxylgruppen på det foregående nukleosid med organisk syre og eksponere hydroxylgruppen til det følgende koblingstrin.3% trichloreddikesyre i dichlormethan eller toluen bruges for det meste til at udføre afbeskyttelsestrinet.Koncentrationen af ​​trichloreddikesyre og afbeskyttelsestiden (afblokeringstiden) dominerer renheden af ​​slutprodukterne.Lav koncentration og utilstrækkelig afblokeringstid efterlader ureageret DMT-gruppe, som reducerer udbyttet og øger de uønskede urenheder.Den lange afblokeringstid kan føre til depurin af syntetiserede sekvenser, hvilket danner de uventede urenheder.

Koblingstrinnet er følsomt over for vandindholdet i opløsningsmidler og fugten i luften.Koncentrationen af ​​vand i syntesen bør være mindre end 40 ppm, bedre mindre end 25 ppm.For at bevare den vandfrie syntesetilstand bør nukleinsyresyntesen udføres i et miljø med lav luftfugtighed, så vi anbefaler vores kunde at brugeAmiditter opløst udstyr, som kan opløse den pulveriserede eller olieagtige Phosphoramidit i vandfri acetonitril for at undgå kontakt med luft.

De faktorer, der bestemmer effektiviteten af ​​DNA-syntese5
De faktorer, der bestemmer DNA-synteseeffektiviteten4

Siden opløsningen af ​​phosphoramiditer er det bedre i ikke-vand situationen, og molekylære fælder til at adsorbere sporvandet i reagenserne og amidit, er det nødvendigt at forberedeMolekylære fælder.Vi anbefaler 2 g undersigt til 50-250 ml reagensflasker, 5 g til 250-500 ml reagensflasker, 10 g til 500-1000 ml reagensflasker og 20 g til 1000-2000 ml reagensflasker.

Opløsningen af ​​phosphoramiditter bør udføres under den inerte atmosfære, og udskiftningen af ​​aktivatorreagenser og acetonitril bør afsluttes i tide.Capping- og Oxidationsreagenserne skal bruges så hurtigt som muligt, de åbnede reagenser giver mindre holdbarhed og mindre aktivitet under syntese.


Indlægstid: Aug-09-2022